组织来源:胆囊癌 生长特性:贴壁生长
完全培养基:RPMI1640(内含2mM L-glutamine)10%胎牛血清 培养条件:37 ℃,CO2:5%
传代方法:收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。用75%酒精喷洒整个培养瓶,放入无菌工作台无菌操作。
1. 弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶(625px2)补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。收到细胞后的第一次传代一般是一传二。
注:1、观察细胞最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。
4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们联系。
冻存方法:冻存液:90%完全培养液,10%DMSO。现用现配 储存:液氮储存